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产品信息
品系编号 | YDS0189 |
品系背景 | C57BL/6 |
常用名 | CCID, CCK-Cre, CCK-Cre-IRES-DsRed2 |
NCBI ID | 12424 |
基因名 | cholecystokinin |
基因位置 | 9号染色体 |
基因表达 | cre,cre recombinase, bacteriophage P1, RFP, Red Fluorescent Protein |
表达部位 | 大脑皮层有高水平的cre表达 |
构建方案
Cck基因有6个转录本。根据Cck基因的结构，选择Cck-201(ENSMUST00000035120.5)作为推荐策略。Cck-201基因有3个外显子，外显子2为ATG起始密码子，外显子3为TAG终止密码子。我们通过CRISPR/Cas9系统制作Cck-IRES-iCre敲入小鼠。Cas9 mRNA、sgRNA和供体将共同注射到受精卵中。sgRNA直接在Cck基因的终止编码（TAG）附近切割Cas9核酸内切酶，并产生DSB（双链断裂）。这样的断裂将被修复，并通过同源重组产生IRES-iCre，然后再停止Cck基因的编码(TAG)。幼崽将通过PCR进行基因分型，然后进行序列分析。
CCK启动子驱动cre -重组酶或绿色荧光蛋白表达时，可以在海马区发现cre -重组酶与CCK基因表达的适当共定位。
图1 cck-cre小鼠模型构建
保种方式
活体保种。当维持一个活的群体时，半合子小鼠可以被繁殖。
生殖泄露
研究应用
研究方向及表型：
工具鼠（精神和神经科学研究的神经肽启动子）
具体内容及相关参考文献：
将 Cre-IRES-DsRed（CCID）的编码序列亚克隆到 CCK-GFP 载体中。然后将这种新质粒 (CCID) 线性化并显微注射到 C57/BL6 胚胎中。这些注射产生了三个携带 CCID 基因的缔造者，随后将它们与 RosaLacZ 报告小鼠交配以评估转基因表达。结果表明CCK 启动子能够驱动转基因构建体中的 Cre 表达， CCID B 系的动物表现出最广泛的 LacZ 表达，这与内源性 CCK 基因表达基本相同，表明当与含有 floxed 转基因的动物杂交时，它们可能适用于产生 CCK 选择性敲除。
Chhatwal JP , et al. Identification of cell-type-specific promoters within the brain using lentiviral vectors.