Rho-iCre 小鼠是一种基因工程小鼠品系,其 Cre 重组酶 的表达受 Rho 启动子(Rhodopsin,视紫红质基因)控制,主要用于研究**视网膜感光细胞(视杆细胞)**相关基因的功能及眼部疾病模型。
特点与功能
1.Rho 启动子驱动 Cre 表达
•Rho 基因(Rhodopsin) 是视杆细胞中特异性表达的基因。
•Rho-iCre 小鼠的 Cre 重组酶在视网膜视杆细胞中表达,用于研究感光细胞相关基因功能及眼部疾病。
2.iCre 系统
•携带改良版 Cre 重组酶 (improved Cre, iCre),其重组效率高于传统 Cre 重组酶,减少背景重组和非特异性表达风险。
3.空间特异性基因编辑
•在视杆细胞中表达,实现特异性的基因敲除或激活,研究与光感受、视觉传导和视网膜疾病相关的基因功能。
主要研究应用
1.视网膜发育与功能研究
•分析视杆细胞的发育和功能,研究其在视觉感光和信号传递中的作用。
2.遗传性视网膜疾病模型
•研究视网膜退行性疾病(如视网膜色素变性、Leber 先天性黑蒙症)的发生机制及基因突变的影响。
3.眼部疾病研究
•模拟视网膜变性和视神经疾病,评估基因敲除或激活对视觉功能的影响,为治疗眼部疾病提供靶点。
4.基因功能研究
•条件性敲除或激活视杆细胞中特定基因,分析光受体细胞的发育、功能维持及光感应机制。
5.基因治疗和干细胞研究
•用于评估基因编辑技术(如 CRISPR/Cas9)或基因递送方法对视网膜感光细胞的修复潜力。
实验操作与注意事项
1.基因型验证
•使用 PCR 检测小鼠是否携带 Rho-iCre 和目标基因的 loxP 位点。
2.特异性验证
•利用报告基因(如 Rosa26-LacZ 或 EYFP)验证 Cre 活性是否严格局限于视杆细胞。
3.对照组设置
•包括未携带 Cre 的野生型小鼠和未激活 Cre 的对照组,以确保结果特异性和可重复性。
4.实验设计注意
•遗传背景差异可能影响视网膜发育和功能,常用背景为 C57BL/6,但实验前需验证基因型和表型一致性。
应用示例
1.视网膜色素变性模型
•敲除光受体维持基因(如 Pde6b 或 Rpe65)以模拟视网膜退行性疾病。
2.光感受机制研究
•在视杆细胞中敲除光受体信号通路相关基因,分析视觉信号传导及调控机制。
3.基因治疗评估模型
•用于验证新型基因治疗策略(如病毒载体基因递送)在感光细胞中的修复效果。
4.视觉生物学基础研究
•探究视网膜光受体细胞的分化、迁移和功能维持机制。
总结
Rho-iCre 小鼠是一种用于研究视杆细胞功能及视觉疾病机制的强大工具。它在视网膜发育、视神经疾病和基因治疗评估方面具有广泛应用。如果需要进一步实验方案设计或详细技术指导,可以随时讨论!