本文聚焦一线实操的各类 “坑点”，标准化从合笼到分娩全流程判定，帮大家避开人为操作带来的各类实验乌龙。

目 录

一、交配前准备

二、判断交配是否发生

三、妊娠判断与监测（按胚胎日龄分期）

四、快速判断流程（时间表）

五、常见问题与判读陷阱

六、参考文献

一交配前准备

1. 合笼时机与方式

体成熟年龄：雌鼠6–8周龄（体重约18–20 g以上）即可配种，更推荐8–12周龄（体成熟）首配；雄鼠8周龄以上、已确认有繁殖能力。

合笼方式：

① 一雄一雌连续同居；

② 一雄二雌（harem）同居；

③ 定时交配（timed mating，傍晚合笼、次日清晨查栓）。定时交配用于需要精确胚胎日龄（E）的实验。

光照周期：保持12 h明/12 h暗的稳定光照周期。小鼠在暗期交配，动情周期受光照节律调控，明暗颠倒或光照不稳会降低配种效率。

⚠️ 重要实操提示：定时交配实验，暗周期下禁止使用白光进行笼盒操作，白光会抑制交配行为；暗期如需观察操作，应当使用红外 / 红光光源。

2. 动情周期（Estrous Cycle）

周期长度：约 4–5 天，分为动情前期（proestrus）、动情期（estrus）、动情后期（metestrus）、间情期（diestrus）。

图1. 成年C57小鼠的发情周期。动情周期阶段以彩色方块表示，其中黄色方块代表动情期，深蓝色和中等蓝色方块分别表示4天或5天的动情周期 [1]。

判断方法：阴道涂片细胞学为动情周期鉴定金标准：动情期以大量角化上皮细胞为主；也可观察外阴——动情期外阴红肿、阴道口张开。

⚠️ 注意：外阴红肿也可由炎症、肥胖个体刺激等非发情因素引起，仅靠外阴肉眼观察容易误判发情，不可单独作为合笼依据。

图2. C57BL/6J小鼠动情周期的四个阶段（左图），代表动情周期各阶段的阴道细胞学涂片。可识别三种细胞类型：白细胞（圆圈）、角化上皮细胞（黑色箭头）和有核上皮细胞（白色箭头）。动情前期（A）、动情期（B）、动情后期（C）、间情期（D）[2]。

最佳合笼时机：动情前期下午合笼，当晚进入动情期交配，次日清晨查栓。

3. 雌鼠发情期外观特征

外阴红肿、湿润，阴道口轻微张开

对雄鼠表现出弓背反射（lordosis，脊柱下凹、尾部偏向一侧）

主动靠近雄鼠、嗅闻与理毛行为增多

二判断交配是否发生

1. 阴道栓（Vaginal Plug）—— 判断交配的“金标准”

形态与成因：交配时雄鼠精液（精囊腺分泌物）在雌鼠阴道内凝固，形成堵塞阴道口的乳白色/淡黄色栓状物。

图3. 小鼠阴道栓

检查时间：合笼后的次日清晨8-10点尽早检查，越晚越容易因栓脱落而漏检。

检查方法：保定雌鼠（抓取颈背部皮肤使其腹部朝上），轻轻分开后腿，直接观察外阴部有无栓状物；如观察不清，可用无菌棉签或探针在阴道口轻拭确认，严禁向阴道深部捅入，避免造成阴道撕裂、出血、感染，造成实验损伤与误判。

见栓判读：傍晚定时交配模式下，见栓当日中午计为E0.5（胚胎第0.5天），这是定时交配计算胚胎日龄的标准做法。

品系差异：C57BL/6阴栓较小、颜色浅、质地软，常在交配后12–24 h内脱落或缩小，需仔细检查；BALB/c、FVB、ICR等品系阴栓通常较明显、留存时间较长。

2. 阴道涂片查精子（补充方法）

适用情况：怀疑已交配但未见到明确阴栓（栓已脱落或被舔食），或需要进一步确认。

⚠️ 时效约束：精子在小鼠阴道内会随时间裂解，取样需要在预估交配发生 12 h 内完成；超过该时间检出阴性没有参考价值。

操作：用移液器或滴管吸取少量无菌生理盐水冲洗阴道，将冲洗液滴于载玻片，镜下寻找精子。

3. 阴栓判读的注意事项

见栓 ≠ 一定妊娠：健康普通野生型小鼠见栓雌鼠中约70–90%最终妊娠（受品系、环境、年龄影响）；基因修饰、老龄、高应激状态小鼠妊娠率会显著低于该区间，其余为假孕或早期胚胎吸收。

未见栓 ≠ 未交配：阴栓可能在检查前已脱落，定时交配中建议同时记录体重与后续妊娠征象。

连续同居（非定时交配）时不必每日查栓，直接观察腹部变化与产仔即可。

三妊娠判断与监测（按胚胎日龄分期）

1. 早期（E0.5–E7）

外观与体重：无明显外观变化；体重与交配前相近或略有波动。此阶段主要依据阴道栓判定。

2. 中期（E8–E12）

体重：约E8–E10起体重开始持续、规律地增加，这是最可靠的无创指标。建议每周固定时间称重2–3次，绘制体重曲线。

腹部触诊：E10–12起可轻轻触诊腹部，感知串珠样排列的胎囊（palpation）。

⚠️ 重要风险提示：

3. 后期（E13–E19）

体重：体重快速增加，妊娠末期可比交配前增加约25–60%（首胎或产仔数少时增幅较小）。

⚠️品系因素：远交高产品系（ICR 等）妊娠末期体重可较交配前增加 40‑60%；C57BL/6J 等近交系增幅多为 25‑40%。

腹型：侧腹明显膨隆，体态呈梨形；从背面观察腹部两侧隆起。

乳腺与乳头：约E13起腹侧乳腺组织明显增生、乳晕增大，到E15–16更为显著，是可靠的妊娠征象。

行为：活动量减少、嗜睡，筑巢行为增强（衔垫料、棉花聚拢成巢）。

4. 临产与分娩（E19–21，品系依赖）

临产预兆：产前24–48 h骨盆韧带松弛、骨盆开口增大；体重出现平台期或轻度下降；母鼠频繁整理巢穴。

⚠️ 提示：C57BL/6J正常妊娠周期多为19‑20d；部分基因修饰小鼠妊娠期可延长；若超过21天仍未分娩，应当评估难产风险，遵循动物伦理规范处理。

分娩时间：多在暗期进行；产后母鼠会舔净仔鼠、吞食胎盘并开始哺乳。

⚠️ 高风险提示：分娩前后24 h尽量避免开箱、抓取母鼠，此阶段扰动是母鼠食仔最高风险诱因。

产后确认：次日清晨巡查笼具，见仔鼠即确认分娩；记录产仔日期与仔鼠数量。

5. 监测注意事项

妊娠后期尽量减少抓取、称重与触诊频率，避免应激导致流产或食仔。

体重标准存在品系差异，建议先建立本品的正常妊娠体重曲线作为基线。

孕鼠于妊娠后期（E15 左右）单独饲养，提供筑巢材料（nestlet、无纺布棉等），保持环境安静。

四快速判断流程（时间表）

五常见问题与判读陷阱

• 见栓但未产仔：多为假孕（约 10–20%）或胚胎早期吸收；假孕持续约10‑14天之后恢复动情周期（10‑12 d为均值，C57BL/6部分个体可达14 d）。

• 未见栓却妊娠：阴栓提前脱落/被清除，或合笼发生在检查前的夜间之后。

• 触诊不可靠：肥胖或产仔数极少的母鼠触诊困难，应以体重曲线 + 乳腺发育综合判断。

• 雄鼠繁殖力下降：除连续产2‑3窝轮换雄鼠外，还需要控制雄鼠每周交配负荷；长期高频交配会造成精子质量下降，降低受孕率；长期同居雄鼠可能因领地争斗或疲劳降低配种率。

• 孕鼠死亡或流产：常见原因包括过度惊扰、营养问题、笼具通风不良、品系固有缺陷（如某些 129 亚系繁殖力低）。

要点 · 判读组合

阴道栓（早期）+ 体重增长曲线（中期）+ 乳腺/腹型（后期）三者结合，可最大程度减少误判。

总结

繁殖实验处处藏 “陷阱”，阴栓会骗人、手感会误导，母鼠的状态也受品系、环境多重影响。不要迷信单一判定指标，多维度交叉核对才是避坑王道。善待实验动物，规范操作、少陷乌龙，让小鼠繁殖实验少走弯路。

六参考文献

[1] Nakamura TJ, Takasu NN, Sakazume S, et al. Long days restore regular estrous cyclicity in mice lacking circadian rhythms. Heliyon. 2023;9(6):e16970. Published 2023 Jun 2. doi:10.1016/j.heliyon.2023.e16970

[2] Byers SL, Wiles MV, Dunn SL, Taft RA. Mouse estrous cycle identification tool and images. PLoS One. 2012;7(4):e35538. doi:10.1371/journal.pone.0035538